Diagnostic indirect en microbiologie

L3 médecine AMIENS 2012/2013 – S5 UE1 – Dr C FRANCOIS - Diagnostic indirect

Diagnostic indirect en microbiologie -

Deux possibilités pour poser un diagnostic en microbiologie : o Soit mise en évidence, observation directe du microorganisme = Diagnostic direct  Bactériologie +++ (ECBU, EPS…) o Soit mise en évidence indirecte du microorganisme par détection des mécanismes immunitaires induits par le pathogène = Diagnostic indirect  Virologie +++

1 Intérêt du diagnostic -

Preuve de l'origine de l'infection Suivi de l'évolution biologique de l'infection Évaluation du statut immunitaire d'un patient Appréciation de la réponse vaccinale Éviter la transmission d'un pathogène au cours de don d'organes (Toxoplasme +++) Étude du pathogène en cause et de ses variants.

2 Étapes du diagnostic -

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Prélèvement → phase pré-analytique (jusqu'à ce que le tube soit « techniqué ») → phase analytique → validation technique → validation biologique → édition du résultat Phase pré-analytique : o prescripteur OBLIGATOIRE o patient : nom/prénom/Sexe/Age.. o Renseignements complémentaires +++  Nature des principales manifestations pathologiques : date d'apparition, localisation des lésions infectieuses, état d'immunodépression, prise d'antiviraux, d'ATB, femme enceinte/date début de grossesse  Voyages récents  Vaccination datée  Transfusion  But de l'analyse Phase analytique : méthodes utilisées : o diagnostic direct o diagnostic indirect

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3 Diagnostic indirect -

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Principalement par mise en évidence d’Ag dans le sérum +++ De moins en moins pratiqué pour la recherche d’Ag dans le LCS maintenant technique de bio mol et diagnostic direct +++ Recherche : o Séroconversion (apparition d’Ac) o ↗ IgG o Présence d’IgM o Avidité des IgG (permet de dater l’infection) mesurée par ELISA +++ :  Faible : infection récente  Forte : infection ancienne Cinétique d’apparition des Ac : o Lorsqu'on introduit un Ag dans l'organisme, le premier type d'Ac produit sont les IgM, il y a ensuite un pic d'IgG (= réponse primaire). o Réintroduction de l’Ag => réponse secondaire avec production d’IgG

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4 Techniques utilisées pour le diagnostic indirect -

Ac avec propriétés définies = neutralisation, hémagglutination Ac sans propriétés définies = ELISA, immunofluorescence indirecte, Western Blot

Échantillon Technique

Principe

Avantages

Pathologies concernées Application

Transport des échantillons Inconvénients

Anticorps sans propriétés Anticorps avec propriétés définies définies Sérum principalement (sérologie) ELISA +++ Séroneutralisation Immunofluorescence indirecte Inhibition de l’hémagglutination Western blot Fixation du complément ème Mise en évidence d’un 2 Ac Utilisation d’une propriété marqué dirigé contre un isotype fonctionnelle particulière d’une sous donné pour révéler le complexe population d’Ac Ag-Ac Distinction possible entre une Valeur protectrice des Ac infection récente (IgM) et ancienne neutralisants ou inhibant l’hémagglutination Très large Limitée à certaines familles de virus Évaluation de l’efficacité d’une vaccination Diagnostic d’infection : ↗ du titre d’Ac entre 2 sérums Pas de conditions particulières

Nombreuses, infections récentes et anciennes

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Fenêtre sérologique (HCV production d’Ac qu’après 70jours, etc.) Impossibilité d’exclure une étiologie Réactions faussement positives (réactions croisées, etc.) Situations compliquant l’interprétation : o Administration passive d’IgG o Hémodilution o États dysimmunitaires

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Western blot = immuno blot = examen de certification quand une sérologie faite par ELISA est positive. Le Western Blot Toxoplasmose permet de savoir si les Ac sont d'origine maternelle ou non et donc s'il y a eu transmission. → seules les IgG maternelles passent le placenta. Si par exemple on retrouve des IgM c'est que le bébé en a produit et cela permet de diagnostiquer une infection in utero. Dans certains cas le dg indirect est inutile puisque certain Ac sont présent chez 8090% des gens (ex : Ac anti HSV). Avidité des IgG : o utilise l'existence d'une maturation de la réponse immunitaire humorale : augmentation de l'affinité intrinsèque paratope/épitope o plus l'infection est ancienne, plus les IgG présentent une avidité élevée, o Intérêt dans les infections materno-foetales. o La détermination de l'avidité : affinité fonctionnelle des IgG permet de distinguer primo infection et infection ancienne → CMZ, rubéole, toxoplasmose

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5 Conclusion -

Quand c'est possible il faut prescrire le diagnostic direct +++ (PCR) o Mais attention à ne pas prescrire inutilement des PCR car cout +++ Conditions de prélèvement +++ Renseignements cliniques

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